Javascript estas nuntempe malŝaltita en via retumilo.Kiam Javaskripto estas malŝaltita, iuj funkcioj de ĉi tiu retejo ne funkcios.
Javier Fidalgo, * Pierre-Antoine Deglesne, * Rodrigo Arroyo, * Lilian Sepúlveda, * Evgeniya Ranneva, Philippe Deprez Sekcio de Scienco, Skin Tech Pharma Group, Castello D'Empúries, Katalunio, Hispanio * Ĉi tiuj aŭtoroj havas kelkajn komprenojn pri ĉi tiu verko Equal kontribua fono: Hialurona acido (HA) estas nature okazanta polisakarido uzata en la produktado de dermaj plenigaĵoj por estetikaj celoj.Ĉar ĝi havas duoniĝotempon de pluraj tagoj en homaj histoj, HA-bazitaj dermaj plenigaĵoj estas kemie modifitaj por plilongigi sian vivon en la korpo.La plej ofta modifo en komercaj HA-bazitaj plenigaĵoj estas la uzo de 1,4-butanediol diglicidiletero (BDDE) kiel krucliga agento por krucligi la HA-ĉenojn.Restaĵo aŭ nereagita BDDE estas konsiderita netoksa je <2 partoj per miliono (ppm);tial, la resta BDDE en la fina dermal plenigaĵo devas esti kvantigita por certigi paciencan sekurecon.Materialoj kaj metodoj: Ĉi tiu studo priskribas la detekton kaj karakterizadon de kromprodukto de la krucliga reago inter BDDE kaj HA sub alkalaj kondiĉoj kombinante likvan kromatografion kaj mas-spektrometrion (LC-MS).Rezultoj: Post malsamaj analizoj, oni trovis, ke la alkalaj kondiĉoj kaj alta temperaturo uzataj por desinfekti la HA-BDDE-hidroĝelon antaŭenigis la formadon de ĉi tiu nova kromprodukto, la "propilenglikolsimila" kunmetaĵo.LC-MS-analizo konfirmis, ke la kromprodukto havas la saman monoizotopan mason kiel BDDE, malsaman retentempon (tR), kaj malsaman UV-sorbadon (λ=200 nm) reĝimon.Male al BDDE, estis observite en LC-MS-analizo ke sub la samaj mezurkondiĉoj, tiu kromprodukto havas pli altan detektoftecon ĉe 200 nm.Konkludo: Ĉi tiuj rezultoj indikas, ke ne ekzistas epoksido en la strukturo de ĉi tiu nova komponaĵo.La diskuto estas malfermita por taksi la riskon de ĉi tiu nova kromprodukto trovita en la produktado de HA-BDDE-hidroĝelo (HA dermal plenigaĵo) por komercaj celoj.Ŝlosilvortoj: hialurona acido, HA dermal plenigaĵo, kruc-ligita hialurona acido, BDDE, LC-MS-analizo, BDDE-kromprodukto.
Plenigaĵoj bazitaj sur hialurona acido (HA) estas la plej oftaj kaj popularaj dermaj plenigaĵoj uzataj por kosmetikaj celoj.1 Ĉi tiu derma plenigaĵo estas hidroĝelo, kutime kunmetita de >95% akvo kaj 0,5-3% HA, kiu donas al ili ĝelan strukturon.2 HA estas polisakarido kaj la ĉefa komponanto de la eksterĉela matrico de vertebruloj.Unu el la ingrediencoj.Ĝi konsistas el (1,4)-glukurona acido-β (1,3)-N-acetilglukozamino (GlcNAc) ripetantaj disakaridaj unuoj ligitaj per glikozidaj ligoj.Ĉi tiu disakarida ŝablono estas la sama en ĉiuj organismoj.Kompare kun iuj protein-bazitaj plenigaĵoj (kiel ekzemple kolageno), ĉi tiu posedaĵo igas HA tre biokongrua molekulo.Tiuj plenigaĵoj povas elmontri aminoacidsekvencospecifecon kiu povas esti rekonita fare de la imunsistemo de la paciento.
Se uzite kiel dermalplenigaĵo, la ĉefa limigo de HA estas sia rapida spezo ene de la histoj pro la ĉeesto de specifa familio de enzimoj nomitaj hialuronidases.Ĝis nun, pluraj kemiaj modifoj en la HA-strukturo estis priskribitaj por pliigi la duoniĝotempon de HA en histoj.3 La plej multaj el tiuj modifoj provas redukti la aliron de hialuronidase al polisakaridaj polimeroj per krucligo de HA-ĉenoj.Tial, pro la formado de pontoj kaj la intermolekulaj kovalentaj ligoj inter la HA-strukturo kaj la krucliga agento, la kruc-ligita HA-hidroĝelo produktas pli da kontraŭ-enzimaj degradaj produktoj ol la natura HA.4-6
Ĝis nun, la kemiaj interligaj agentoj uzataj por produkti ligitan HA inkluzivas metacrilamidon, 7 hidrazido, 8 carbodiimide, 9 divinil sulfone, 1,4-butanediol diglicidiletero (BDDE) Kaj poli(etilenglikolo) diglicidiletero.10 ,11 BDDE estas nuntempe la plej ofte uzata interliga agento.Kvankam ĉi tiuj specoj de hidroĝeloj pruviĝis esti sekuraj dum jardekoj, la krucligaj agentoj uzitaj estas reaktivaj reakciiloj kiuj povas esti citotoksaj kaj, en kelkaj kazoj, mutagenaj.12 Tial ilia resta enhavo en la fina hidroĝelo devas esti alta.BDDE estas konsiderita sekura kiam la resta koncentriĝo estas malpli ol 2 partoj per miliono (ppm).4
Ekzistas pluraj metodoj por detekti malalt-restaĵan BDDE-koncentriĝon, krucligan gradon kaj anstataŭigan pozicion en HA-hidroĝeloj, kiel gaskromatografio, grandekskludkromatografio kunligita kun mas-spektrometrio (MS), fluoreskecaj mezurmetodoj de nuklea magneta resonanco (NMR), kaj Diodaro kunligita alta rendimento likva kromatografio (HPLC).13-17 Ĉi tiu studo priskribas la detekton kaj karakterizadon de kromprodukto en la fina krucligita HA-hidroĝelo produktita per la reago de BDDE kaj HA sub alkalaj kondiĉoj.HPLC kaj likva kromatografio-masa spektrometrio (LC-MS-analizo).Ĉar la tokseco de ĉi tiu kromprodukto de BDDE estas nekonata, ni rekomendas ke ĝia restkvanto estu determinita en simila maniero al la metodo kutime farita sur BDDE en la fina produkto.
La akirita natria salo de HA (Shiseido Co., Ltd., Tokio, Japanio) havas molekula pezo de ~1,368,000 Da (Laurent-metodo) 18 kaj interna viskozeco de 2,20 m3/kg.Por la interliga reago, BDDE (≥95%) estis aĉetita de Sigma-Aldrich Co. (St. Louis, MO, Usono).Fosfato bufrita salo kun pH 7.4 estis aĉetita de Sigma-Aldrich Company.Ĉiuj solviloj, acetonitrilo kaj akvo uzataj en la analizo de LC-MS estis aĉetitaj de HPLC-grada kvalito.Formika acido (98%) estas aĉetita kiel reakciila grado.
Ĉiuj eksperimentoj estis faritaj sur UPLC Acquity-sistemo (Waters, Milford, MA, Usono) kaj konektitaj al API 3000 triobla kvarpola mas-spektrometro ekipita per elektrospray joniga fonto (AB SCIEX, Framingham, MA, Usono).
La sintezo de kruc-ligitaj HA-hidroĝeloj estis komencita aldonante 198 mg da BDDE al 10% (w/w) natria hialuronato (NaHA) solvo en la ĉeesto de 1% alkala (natria hidroksido, NaOH).La fina BDDE-koncentriĝo en la reagmiksaĵo estis 9.9 mg/mL (0.049 mM).Tiam, la reakcia miksaĵo estis plene miksita kaj homogenigita kaj permesita daŭrigi je 45 °C dum 4 horoj.19 La pH de la reago estas konservita ĉe ~12.
Poste, la reakcia miksaĵo estis lavita per akvo, kaj la fina HA-BDDE-hidroĝelo estis filtrita kaj diluita per PBS-bufro por atingi HA-koncentriĝon de 10 ĝis 25 mg/mL, kaj finan pH de 7,4.Por steriligi la produktitajn krucligitajn HA-hidroĝelojn, ĉiuj tiuj hidroĝeloj estas aŭtoklavigitaj (120 °C dum 20 minutoj).La purigita BDDE-HA-hidroĝelo estas konservita je 4 °C ĝis analizo.
Por analizi la BDDE ĉeestantan en la kruc-ligita HA-produkto, specimeno de 240 mg estis pesita kaj enkondukita en la centran truon (Microcon®; Merck Millipore, Billerica, MA, Usono; volumo 0,5 mL) kaj centrifugata je 10,000 rpm ĉe ĉambra temperaturo. 10 minutoj.Entute 20 µL da tirmalsupren likvaĵo estis kolektita kaj analizita.
Por analizi la BDDE-normon (Sigma-Aldrich Co) sub alkalaj kondiĉoj (1%, 0.1% kaj 0.01% NaOH), se la sekvaj kondiĉoj estas plenumitaj, la likva specimeno estas 1:10, 1:100 aŭ ĝis. 1:1,000,000 Se necese, uzu MilliQ-dejonigitan akvon por analizo.
Por la komencaj materialoj uzataj en la krucliga reago (HA 2%, H2O, 1% NaOH kaj 0.049 mM BDDE), 1 mL de ĉiu specimeno preparita el ĉi tiuj materialoj estis analizitaj uzante la samajn analizkondiĉojn.
Por determini la specifecon de la pintoj aperantaj en la jona mapo, 10 µL de 100 ppb BDDE-normsolvo (Sigma-Aldrich Co) estis aldonitaj al la 20 µL provaĵo.En ĉi tiu kazo, la fina koncentriĝo de la normo en ĉiu provaĵo estas 37 ppb.
Unue, preparu BDDE-akcian solvon kun koncentriĝo de 11,000 mg/L (11,000 ppm) diluante 10 μL de norma BDDE (Sigma-Aldrich Co) kun 990 μL MilliQ-akvo (denseco 1,1 g/mL).Uzu ĉi tiun solvon por prepari 110 µg/L (110 ppb) BDDE-solvon kiel meza norma diluo.Poste, uzu la mezan BDDE-norman diluilon (110 ppb) por prepari la norman kurbon diluante la mezan diluilon plurfoje por atingi la deziratan koncentriĝon de 75, 50, 25, 10 kaj 1 ppb.Kiel montrite en Figuro 1, estas trovita ke la BDDE-norma kurbo de 1.1 ĝis 110 ppb havas bonan linearecon (R2>0.99).La norma kurbo estis ripetita en kvar sendependaj eksperimentoj.
Figuro 1 BDDE-norma kalibra kurbo akirita per LC-MS-analizo, en kiu bona korelacio estas observata (R2>0.99).
Mallongigoj: BDDE, 1,4-butanediol diglicidila etero;LC-MS, likva kromatografio kaj mas-spektrometrio.
Por identigi kaj kvantigi la BDDE-normojn ĉeestantajn en la kruc-ligitaj HA kaj la BDDE-normoj en la bazsolvo, LC-MS-analizo estis uzita.
La kromatografia apartigo estis atingita sur LUNA 2.5 µm C18(2)-HST-kolumno (50×2.0 mm2; Phenomenex, Torrance, CA, Usono) kaj konservita ĉe ĉambra temperaturo (25 °C) dum la analizo.La movebla fazo konsistas el acetonitrilo (solvento A) kaj akvo (solvento B) enhavantaj 0.1% formicacidon.La mova fazo estas eluita per gradienta elucio.La gradiento estas jena: 0 minutoj, 2% A;1 minuto, 2% A;6 minutoj, 98% A;7 minutoj, 98% A;7,1 minutoj, 2% A;10 minutoj , 2% A. La rultempo estas 10 minutoj kaj la injekta volumeno estas 20 µL.La retentempo de BDDE estas proksimume 3.48 minutoj (inter 3.43 ĝis 4.14 minutoj surbaze de eksperimentoj).La movebla fazo estis pumpita kun flukvanto de 0.25 mL/min por LC-MS-analizo.
Por BDDE-analizo kaj kvantigo de MS, la UPLC-sistemo (Akvoj) estas kombinita kun API 3000 triobla kvarpola mas-spektrometro (AB SCIEX) ekipita per elektrospray-jonigfonto, kaj la analizo estas farita en pozitiva jona reĝimo (ESI+).
Laŭ la analizo de jona fragmento farita sur BDDE, la fragmento kun la plej alta intenseco estis determinita esti la fragmento responda al 129.1 Da (Figuro 6).Tial, en la plurjona monitora reĝimo (MIM) por kvantigo, la maskonverto (maso-al-ŝarĝa rilatumo [m/z]) de BDDE estas 203.3/129.1 Da.Ĝi ankaŭ uzas plenan skanadon (FS) reĝimon kaj produktojonan skanadon (PIS) reĝimon por LC-MS-analizo.
Por kontroli la specifecon de la metodo, malplena specimeno (komenca movebla fazo) estis analizita.Neniu signalo estis detektita en la malplena specimeno kun amasa konvertiĝo de 203.3/129.1 Da.Koncerne la ripeteblon de la eksperimento, 10 normaj injektoj de 55 ppb (en la mezo de la kalibrada kurbo) estis analizitaj, rezultigante restan norman devion (RSD) <5% (datenoj ne montritaj).
La resta BDDE-enhavo estis kvantigita en ok malsamaj aŭtoklavigitaj BDDE kruc-ligitaj HA-hidroĝeloj, egalrilatante al kvar sendependaj eksperimentoj.Kiel priskribite en la sekcio "Materialoj kaj Metodoj", la kvantigo estas taksita per la averaĝa valoro de la regresa kurbo de la BDDE-norma diluo, kiu respondas al la unika pinto detektita ĉe la BDDE-masa transiro de 203.3/129.1 Da, kun reteno. tempo de 3.43 ĝis 4.14 minutoj Ne atendante.Figuro 2 montras ekzemplon de kromatogramo de la 10 ppb BDDE-referenconormo.Tablo 1 resumas la restan BDDE-enhavon de ok malsamaj hidroĝeloj.La valorintervalo estas 1 ĝis 2,46 ppb.Tial, la resta BDDE-koncentriĝo en la provaĵo estas akceptebla por homa uzo (<2 ppm).
Figuro 2 Jona kromatogramo de 10 ppb BDDE-referenca normo (Sigma-Aldrich Co), MS (m/z) transiro akirita per LC-MS-analizo de 203.30/129.10 Da (en pozitiva MRM-reĝimo).
Mallongigoj: BDDE, 1,4-butanediol diglicidila etero;LC-MS, likva kromatografio kaj mas-spektrometrio;MRM, multobla reakcia monitorado;MS, maso;m/z, maso-al-ŝarga rilatumo.
Notu: Specimenoj 1-8 estas aŭtoklavigitaj BDDE-krucligitaj HA-hidroĝeloj.La resta kvanto de BDDE en la hidroĝelo kaj la pinto de BDDE retentempo ankaŭ estas raportitaj.Finfine, la ekzisto de novaj pintoj kun malsamaj retentempoj ankaŭ estas raportita.
Mallongigoj: BDDE, 1,4-butanediol diglicidila etero;HA, hialurona acido;MRM, multobla reakcia monitorado;tR, retentempo;LC-MS, likva kromatografio kaj mas-spektrometrio;RRT, relativa retentempo.
Surprize, la analizo de la LC-MS-jonkromatogramo montris, ke surbaze de ĉiuj aŭtoklavigitaj kruc-ligitaj HA-hidroĝelaj specimenoj analizitaj, estis ekstra pinto ĉe la pli mallonga retentempo de 2,73 ĝis 3,29 minutoj.Ekzemple, Figuro 3 montras la jonkromatogramon de kruc-ligita HA-provaĵo, kie kroma pinto aperas en malsama retentempo de proksimume 2.71 minutoj.La observita relativa retentempo (RRT) inter la lastatempe observita pinto kaj la pinto de BDDE estis trovita esti 0.79 (Tabelo 1).Ĉar ni scias ke la lastatempe observita pinto estas malpli retenita en la C18-kolumno uzita en la LC-MS-analizo, la nova pinto povas egalrilati al pli polusa kunmetaĵo ol BDDE.
Figuro 3 Jona kromatogramo de kruc-ligita HA-hidroĝela specimeno akirita per LC-MS (MRM-masa konvertiĝo 203.3/129.0 Da).
Mallongigoj: HA, hialurona acido;LC-MS, likva kromatografio kaj mas-spektrometrio;MRM, multobla reakcia monitorado;RRT, relativa retentempo;tR, retentempo.
Por ekskludi la eblecon, ke la novaj pintoj observitaj povas esti poluaĵoj origine ĉeestantaj en la uzitaj krudmaterialoj, ĉi tiuj krudaĵoj ankaŭ estis analizitaj per la sama analizmetodo LC-MS.La startmaterialoj analizitaj inkludas akvon, 2% NaHA en akvo, 1% NaOH en akvo, kaj BDDE ĉe la sama koncentriĝo uzita en la krucliga reago.La jonkromatogramo de la komenca materialo uzita ne montris ajnan kunmetaĵon aŭ pinton, kaj ĝia retentempo egalrilatas al la nova pinto observita.Ĉi tiu fakto forĵetas la ideon, ke ne nur la komenca materialo povas enhavi iujn komponaĵojn aŭ substancojn, kiuj povas malhelpi la analizan proceduron, sed ne estas signo de ebla kruc-poluado kun aliaj laboratorioproduktoj.La koncentriĝaj valoroj akiritaj post LC-MS-analizo de BDDE kaj novaj pintoj estas montritaj en Tabelo 2 (specimenoj 1-4) kaj la jona kromatogramo en Figuro 4.
Noto: Specimenoj 1-4 respondas al la krudmaterialoj uzataj por produkti aŭtoklavitajn BDDE-krucigajn HA-hidroĝelojn.Tiuj specimenoj ne estis aŭtoklavigitaj.
Mallongigoj: BDDE, 1,4-butanediol diglicidila etero;HA, hialurona acido;LC-MS, likva kromatografio kaj mas-spektrometrio;MRM, plurreaga monitorado.
Figuro 4 respondas al la LC-MS-kromatogramo de specimeno de la kruda materialo uzata en la krucliga reago de HA kaj BDDE.
Noto: Ĉiuj ĉi tiuj estas mezuritaj ĉe la sama koncentriĝo kaj rilatumo uzataj por efektivigi la krucligan reagon.La nombroj por la krudmaterialoj analizitaj per la kromatogramo respondas al: (1) akvo, (2) 2% HA akva solvaĵo, (3) 1% NaOH akva solvaĵo.LC-MS-analizo estas farita por amasa konvertiĝo de 203.30/129.10 Da (en pozitiva MRM-reĝimo).
Mallongigoj: BDDE, 1,4-butanediol diglicidila etero;HA, hialurona acido;LC-MS, likva kromatografio kaj mas-spektrometrio;MRM, plurreaga monitorado.
La kondiĉoj kiuj kondukis al la formado de novaj pintoj estis studitaj.Por studi kiel la reagkondiĉoj uzitaj por produkti la krucligitan HA-hidroĝelon influas la reagemon de la BDDE-interliga agento, kaŭzante la formadon de novaj pintoj (eblaj kromproduktoj), malsamaj mezuradoj estis faritaj.En ĉi tiuj determinoj, ni studis kaj analizis la finan BDDE-kruciganton, kiu estis traktita kun malsamaj koncentriĝoj de NaOH (0%, 1%, 0.1% kaj 0.01%) en akva medio, sekvita per aŭ sen aŭtoklavo.La bakteria proceduro por simuli la samajn kondiĉojn estas la sama kiel la metodo uzita por produkti la krucligitan HA-hidroĝelon.Kiel priskribite en la sekcio "Materialoj kaj Metodoj", la amasa transiro de la specimeno estis analizita de LC-MS al 203.30/129.10 Da.La BDDE kaj la koncentriĝo de la nova pinto estas kalkulitaj, kaj la rezultoj estas montritaj en Tabelo 3. Neniuj novaj pintoj estis detektitaj en la specimenoj kiuj ne estis aŭtoklavigitaj, sendepende de la ĉeesto de NaOH en la solvaĵo (specimenoj 1-4, Tabelo). 3).Por aŭtoklavitaj provaĵoj, novaj pintoj estas nur detektitaj en la ĉeesto de NaOH en la solvaĵo, kaj la formado de la pinto ŝajnas dependi de la NaOH-koncentriĝo en la solvo (provaĵoj 5-8, Tablo 3) (RRT = 0.79).Figuro 5 montras ekzemplon de jonkromatogramo, montrante du aŭtoklavitajn provaĵojn en la ĉeesto aŭ foresto de NAOH.
Mallongigoj: BDDE, 1,4-butanediol diglicidila etero;LC-MS, likva kromatografio kaj mas-spektrometrio;MRM, plurreaga monitorado.
Noto: La supra kromatogramo: La specimeno estis traktita kun 0.1% NaOH akva solvaĵo kaj aŭtoklavita (120 °C dum 20 minutoj).Malsupra kromatogramo: La specimeno ne estis traktita kun NaOH, sed aŭtoklavo sub la samaj kondiĉoj.La amasa konvertiĝo de 203.30/129.10 Da (en pozitiva MRM-reĝimo) estis analizita de LC-MS.
Mallongigoj: BDDE, 1,4-butanediol diglicidila etero;LC-MS, likva kromatografio kaj mas-spektrometrio;MRM, plurreaga monitorado.
En ĉiuj aŭtoklavitaj specimenoj, kun aŭ sen NaOH, la BDDE-koncentriĝo estis tre reduktita (ĝis 16.6 fojojn) (specimenoj 5-8, Tabelo 2).La malkresko en BDDE-koncentriĝo povas ŝuldiĝi al la fakto ke ĉe altaj temperaturoj, akvo povas funkcii kiel bazo (nukleofilo) por malfermi la epoksidan ringon de BDDE por formi 1,2-diol-kunmetaĵon.La monoizotopa kvalito de tiu kunmetaĵo estas diferenca de tiu de BDDE kaj tial ne estos trafita.LC-MS detektis amasŝanĝon de 203.30/129.10 Da.
Finfine, tiuj eksperimentoj montras ke la generacio de novaj pintoj dependas de la ĉeesto de BDDE, NAOH, kaj la aŭtoklava procezo, sed havas nenion farendaĵo kun HA.
La nova pinto trovita je retentempo de proksimume 2.71 minutoj tiam estis karakterizita per LC-MS.Por ĉi tiu celo, BDDE (9,9 mg/mL) estis kovata en 1% NaOH akva solvaĵo kaj aŭtoklavo.En Tabelo 4, la karakterizaĵoj de la nova pinto estas komparitaj kun la konata BDDE-referencopinto (retentempo proksimume 3.47 minutoj).Surbaze de la jonfragmenta analizo de la du pintoj, oni povas konkludi ke la pinto kun retentempo de 2.72 minutoj montras la samajn fragmentojn kiel la BDDE-pinto, sed kun malsamaj intensecoj (Figuro 6).Por la pinto responda al la retentempo (PIS) de 2.72 minutoj, pli intensa pinto estis observita post fragmentiĝo ĉe maso de 147 Da.Ĉe la BDDE-koncentriĝo (9.9 mg/mL) uzata en ĉi tiu determino, malsamaj absorbaj reĝimoj (UV, λ=200 nm) en la ultraviola spektro ankaŭ estis observitaj post kromatografia apartigo (Figuro 7).La pinto kun retentempo de 2.71 minutoj daŭre estas videbla ĉe 200 nm, dum la BDDE-pinto ne povas esti observita en la kromatogramo sub la samaj kondiĉoj.
Tabelo 4 Karakterizrezultoj de la nova pinto kun retentempo de proksimume 2.71 minutoj kaj la BDDE-pinto kun retentempo de 3.47 minutoj
Noto: Por akiri ĉi tiujn rezultojn, LC-MS kaj HPLC-analizoj (MRM kaj PIS) estis faritaj sur la du pintoj.Por HPLC-analizo, UV-detekto kun ondolongo de 200 nm estas uzata.
Mallongigoj: BDDE, 1,4-butanediol diglicidila etero;HPLC, alta rendimento likva kromatografio;LC-MS, likva kromatografio kaj mas-spektrometrio;MRM, multobla reakcia monitorado;m/z, proporcio maso-al-ŝarĝo;PIS, produkto Jona skanado;ultraviola lumo, ultraviola lumo.
Notu: La masaj fragmentoj estas akiritaj per LC-MS-analizo (PIS).Supra kromatogramo: masspektro de BDDE-normaj specimenfragmentoj.Malsupra kromatogramo: La mas-spektro de la nova pinto detektita (RRT asociita kun la BDDE-pinto estas 0.79).BDDE estis prilaborita en 1% NaOH-solvo kaj aŭtoklavo.
Mallongigoj: BDDE, 1,4-butanediol diglicidila etero;LC-MS, likva kromatografio kaj mas-spektrometrio;MRM, multobla reakcia monitorado;PIS, produkta jona skanado;RRT, relativa retentempo.
Figuro 7 Jonkromatogramo de la 203.30 Da antaŭjoro, kaj (A) la nova pinto kun retentempo de 2.71 minutoj kaj (B) la UV-detekto de la BDDE-referenca normpinto je 3.46 minutoj ĉe 200 nm.
En ĉiuj kruc-ligitaj HA-hidroĝeloj produktitaj, estis observite ke la resta BDDE-koncentriĝo post LC-MS-kvantigo estis <2 ppm, sed nova nekonata pinto aperis en la analizo.Ĉi tiu nova pinto ne kongruas kun la norma produkto de BDDE.La BDDE-norma produkto ankaŭ spertis la saman kvalitan konvertiĝon (MRM-konverto 203.30/129.10 Da) analizon en la pozitiva MRM-reĝimo.Ĝenerale, aliaj analizaj metodoj kiel ekzemple kromatografio estas utiligitaj kiel limtestoj por detekti BDDE en hidroĝeloj, sed la maksimuma detektlimo (LOD) estas iomete pli malalta ol 2 ppm.Aliflanke, ĝis nun, NMR kaj MS estis uzitaj por karakterizi la gradon da krucligo kaj/aŭ modifo de HA en la sukerunuofragmentoj de krucligitaj HA-produktoj.La celo de ĉi tiuj teknikoj neniam estis kvantigi restan BDDE-detekto ĉe tiaj malaltaj koncentriĝoj kiel ni priskribas en ĉi tiu artikolo (LOD de nia LC-MS-metodo = 10 ppb).
Afiŝtempo: Sep-01-2021